嘔吐毒素免疫親和柱測定的原理

　　本產(chǎn)品測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，DON與抗體結(jié)合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。z后采用甲醇洗脫DON，然后進(jìn)行相關(guān)分析。

　　凈化過程

　　注意：整個(gè)純化過程盡量不要讓柱子干燥!

　　3mL柱管取出上方堵頭，減去上堵頭螺紋下突出部分，插回柱子上，另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上(柱管內(nèi)偶見有小氣泡屬正常現(xiàn)象，不影響親和柱的使用);

　　準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液，注入針筒中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;

　　用20mL水沖洗柱子(對(duì)于飼料及玉米加工副產(chǎn)品等顏色較深的樣液，先用10mL0.1%吐溫20-PBS清洗，再用10mL10%甲醇-水沖洗柱子，z后用10mL水沖洗柱子。)，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體;

　　準(zhǔn)確加入1.5mL甲醇(色譜級(jí))洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體。收集全部洗脫液，進(jìn)行相關(guān)測定。

　　嘔吐毒素免疫親和柱的檢測方法

　　IAC-HPLC法檢測

　　過有機(jī)濾膜(孔徑0.22μm)后，直接HPLC測定;或在50℃下用氮?dú)饩従彽卮抵两?，加入流?dòng)相混勻，過有機(jī)濾膜(孔徑0.22μm)后，參照GB5009.111-2016或GB/T30956-2014條件進(jìn)行HPLC測定。

　　使用注意事項(xiàng)

　　(1)嘔吐毒素對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。

　　(2)不要使用過有效期的免疫親和柱。

　　(3)免疫親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。

　　(4)使用前，免疫親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。

　　(5)HPLC液相測定值、試劑盒計(jì)算值接近z高檢出值時(shí)，樣本的實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿，建議減少上樣體積重新過柱。

　　(6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整，建議z低不少于10g樣。

　　以上便是今天關(guān)于嘔吐毒素免疫親和柱的凈化檢測方法及需要注意的地方的全部分享了，希望對(duì)大家今后使用本設(shè)備能有幫助。